Анализ крови ПЦР-методикой: диагностика на туберкулез

Анализ крови по ПЦР-методике на туберкулез – современная диагностика выявления абсолютно всех штаммов инфекционного заболевания и их очагов в биоматериале организма человека.

Анализ крови и мочи методикой ПЦР на туберкулез – является фактически обязательным исследованием скрытого проистекания заболевания, передающегося не только воздушно-капельным путем, но и посредством контакта с насекомыми. Туберкулез представляет собой достаточно специфическое инфекционное заболевание, очаг которого в тканях любого человека может находиться на протяжении многих лет, а выход распространения найти в течение нескольких недель. Именно потому сдавать анализы крови либо мочи на выявление туберкулеза стоит наряду с основными исследованиями.

Что важно знать

image Фото палочки Коха (Mycobacterium tuberculosis) под микроскопом

Туберкулез – инфекционное заболевание, вызываемое микобактерией – палочка Коха. Чаще поражаются легкие, но очаги могут быть и в других тканях. Передается респираторно, а также со слюной, кровью, при совместном использовании бытовых приборов и тесном контакте в быту.

Заболевание протекает в двух формах:

  1. Закрытая стадия. Больной при контакте не опасен для окружающих. В мокроте анализы не выявляются признаки возбудителей, ложной будет и ПЦР диагностика на туберкулез. При отсутствии лечения патогенез усугубляется.
  2. Открытая стадия. Палочка Коха присутствует в биологических жидкостях человека, легко диагностируется лабораторными методиками. В таком состоянии человек является опасным для окружающих.

Обратите внимание. Поскольку начало туберкулеза легких протекает латентно, то проводится скрининг. Взрослые люди должны раз в год или два (зависит от региона проживания) проходить флюорографию, которая показывает наличие инфильтрата в тканях. Это дешёвый и быстрый способ диагностики.

На данный момент для выявления опасных микобактерий проводят ряд анализов:

  • методы рентгенографии;
  • КТ или МРТ;
  • туберкулиновые пробы (реакция Манту).

Однако именно анализ крови на ПЦР на туберкулез дает наиболее достоверный результат, причем определяет наличие инфекции вне зависимости от локации очага.

Диаскинтест тест

Он проводится детям с 8 лет. Также является кожной пробой. Но если в Манту используются антигены как человеческого, так и бычьего туберкулеза, то в диаскинтесте — только антигены туберкулеза человека. Диаскинтест гораздо более специфичен: реакция на него возникает, только если в организме есть активные бактерии туберкулеза. Проще говоря — если проба Манту положительная, это ещё ничего не значит: эта проба часто дает и ложноположительные реакции. А вот после диаскинтеста появилась реакция — это более серьёзный показатель.

Точность Манту составляет 50-70%, диаскинтеста — 90%.

Показания к проведению

Не проходящий кашель один из симптомов, при котором показано обследование на туберкулез

Врач фтизиатр, пульмонолог или терапевт может направить больного на прохождение диагностики при наличии подозрений.

Кроме этого, тест ПЦР на туберкулез требуется, если:

  • возможны внелегочные очаги;
  • наличие признаков бактериемии на фоне туберкулезной инфекции (субфебрилитет, потливость и прочие);
  • при регулярном контакте с инфицированным человеком;
  • при ВИЧ-инфекции;
  • ПЦР диагностика туберкулеза у детей показана при ненормальной реакции на пробу Манту;
  • сильные увеличения лимфоузлов при заболевании нижних дыхательных путей (прикорневые воспаления легких, бронхиты);
  • кровохарканье при этом человек слаб и быстро утомляется;
  • длительный кашель после острых бронхитов и пневмоний.

В каких случаях назначают анализ

У туберкулезного поражения почек отсутствуют специфические симптомы, поэтому пациенты длительно, но без стойкого эффекта будут проходить лечение с различными урологическими или гинекологическими диагнозами:

  • циститом;
  • простатитом;
  • пиелитом;
  • пиелонефритом;
  • сальпингоофоритом;
  • мочекаменной болезнью.

Если же у человека уже диагностирована легочная инфекция, то при наличии симптомов поражения мочеполовой системы обязательно проводят анализ мочи на туберкулез почек трижды. Признаки заболевания, указывающие на инфицирование палочкой Коха, включают следующие жалобы:

  • боль в пояснице;
  • дизурия;
  • выделение крови или гноя с мочой.

Исследование мочи при туберкулезе легких преимущественно не определяет каких-либо изменений, а при вовлечении в процесс тканей мочеполовой системы в лаборатории находят отклонения в показателях, которые позволяют заподозрить диагноз туберкулеза:

  • pH меньше 4,0;
  • увеличение количества лейкоцитов и эритроцитов;
  • гвоздевидные лейкоциты в моче;
  • положительная реакция на белок;
  • гной в моче, особенно без бактериовыделения.

По анализу крови также выявляют неспецифичные изменения: анемию, лейкоцитоз. При этих изменениях может понадобиться дополнительное обследование пациента. У мужчин подозрением на туберкулез считают рецидивирующие симптомы поражения простаты, когда затруднено мочеиспускание, железа увеличена или сморщена, длительно выделяется гной или кровь со спермой.

Выявление туберкулеза не исключает его одновременное развитие на фоне других патологий органов мочевыделения.

Что представляет из себя ПЦР

Принцип ПЦР анализа

Полимеразная цепная реакция основана на узнавании целых цепочек бактериальной ДНК и РНК или их фрагментов, находящихся в крови пациента или других биологических жидкостях:

  • мокрота;
  • легочные и бронхиальные смывы;
  • моча.

Обратите внимание. Высокая результативность данной методики основана на принципе работы фермента полимеразы (основная функция сборка нуклеиновых молекул). Она может узнавать даже самые мелкие фрагменты генного материала возбудителя. Поэтому результат будет положительный или отрицательный.

Преимущества анализа ПЦР на микобактерии туберкулеза:

  • выявление специфических последовательностей ДНК микобактерий;
  • точность – 98%;
  • чувствительность анализа не менее 100 ДНК-копий в 5 мкл пробе, прошедшей особую обработку;
  • срочный анализ дает возможность получить результат в течение 4 ч., после забора крови.

Использование полимеразной цепной реакции существенно облегчило определение многих заболеваний (не только туберкулеза). Причем метод позволяет регистрировать наличие патогена на самых начальных стадиях патогенеза, когда нет еще никаких признаков. Гарантированность результата обеспечивается благодаря тому, что полимераза среди тысяч клеток может находить по определенному маркеру комплементарные (подходящие) только ей последовательности бактериальных генов или даже их фрагменты.

Помимо этого, ПЦР при туберкулезе помогает выяснить уровень резистентности к назначенной терапии и скорректировать лечение, что в разы повышает его эффективность. Длительность такого анализа три, максимум четыре дня, но при этом врач получает данные, существенно меняющие качество противотуберкулезной терапии. Более подробно обо всех нюансах полимеразной цепной реакции изложено на видео в этой статье.

T.SPOT.TB («ти-спот»)

TЭтот метод диагностики туберкулеза по крови аналогичен квантифероновому тесту. Отличие в том, что квантифероновый тест определяет в крови гамма-интерферон, вырабатываемый в ответ на внедрение туберкулезной палочки, а Т-СПОТ определяет сами Т-клетки, которые вырабатывают гамма-интерферон на присутствие микобактерии туберкулеза. Оба теста одинаково чувствительны и информативны (до 97%), они чувствительнее диаскинтеста и намного чувствительнее реакции Манту. «Ти-спот» практически исключает ложноположительные и ложноотрицательные реакции, в то время как квантифероновый тест все-таки может давать ложноположительную реакцию, если во время сдачи крови человек был, например, болен ОРВИ.

Методика выполнения

Инструкция проведения анализа на данный момент не представляет особой сложности: сначала проводится отбор исследуемого материала, после чего выделяется ДНК и проводится его классификация по типу патогенной бактерии. Основные моменты указаны в таблице.

Таблица. Как проводится анализ ПЦР на туберкулез:

Действие Комментарий

Получение образца

У пациента берут определенное количество крови, мокроты, мочи или смывы с бронхов.

Денатурация ДНК

Полученный материал должен быть на несколько минут нагрет до высоких температур (97º С). Такая мера нужна для расщепления парных молекул нуклеиновых кислот на отдельные цепи (разрыв спирали). Это нужно для того, чтобы полимераза начала работу.

Отжиг

При понижении температуры особая молекулярная структура праймер, ассоциируется с одной из свободных цепей ДНК, что позволит в дальнейшем инициировать сборку новой спирали.

Элонгация

Полимераза начинает сборку новых цепей генома.

Анализ результата

Если полимераза нашла нужные бактериальные последовательности и начала сборку, то результат положительный, в противном случае отрицательный.

Для получения достоверного результата, дающего максимальную точность, понадобится проведение около 25–30 циклов, что даст возможность получить необходимое количество копий бактериальных ДНК. При этом они подлежат классификации. Это требует наличия специально оборудованной лаборатории, поэтому не во всех регионах есть возможность проведения ПЦР. Соответственно и цена исследования не является низкой.

В особых случаях данный метод является единственно возможным или крайне необходимым, например:

  • при наличии противопоказаний к другим диагностикам;
  • в спорных ситуациях;
  • при рецидиве туберкулеза;
  • определение стадийности патогенеза.

Заметка. Если анализ ПЦР проводится для человека после противотуберкулезной терапии, то результат может быть ложноположительным. Это связано с наличием в крови очень малого количества мертвых бактерий или они еще находятся на стадии лизиса (клеточной смерти).

ПЦР — ни одна инфекция не останется не обнаруженнойПЦР — ни одна инфекция не останется не обнаруженной

Зачем нужна прививка БЦЖ?

ВОЗ рекомендует массовую вакцинацию новорожденных против туберкулёза во всех странах, где эта болезнь распространена. Поэтому на 3-5 день после рождения, еще в роддоме, всем новорожденным бесплатно делают прививку БЦЖ. Но эта вакцина не защищает от инфицирования туберкулёзом. Её задача несколько иная. Если не привитый ребенок младше 2 лет будет инфицирован туберкулёзом, у него крайне высока вероятность развития туберкулезного менингита и генерализованных форм туберкулеза, которые очень быстро приводят к смерти. БЦЖ достаточно надёжно защищает ребенка именно от этих форм. Она также защищает детей от легочной формы туберкулеза, но уже менее эффективно.

ПЦР анализ мочи на туберкулез

Моча, собранная в контейнер для анализа

Суть метода та же, что и при исследовании крови. Однако в данном случае требуется определенный алгоритм сдачи и подготовки. ПЦР мочи поможет выявить микобактерии при наличии очагов в органах выделительной системы и подобрать соответствующую терапию.

Перед забором урины важно хорошо вымыть гениталии. Утреннюю мочу (среднюю порцию) собирают в контейнер и отправляют в лабораторию. Других подготовительных мер не требуется, питание накануне анализа остается без изменений.

Подготовка к анализам

ПЦР мочи на туберкулез может применяться вместо Манту у детей и взрослых для уточнения диагноза. Важно сдать первую утреннюю порцию урины, полученную до приема пищи, употребления жидкостей. Как и на общий анализ мочи, на бактериоскопию требуется средняя порция (около 50-100 мл). Предварительно важно за 1-2 суток ограничить употребление в пищу моркови, свеклы, черники и прочих красящих продуктов, которые могут придавать моче нехарактерный для нее цвет. Кроме того, запрещено употребление алкогольных напитков, вступление в половое сношение.

Женщинам необходимо дождаться окончания менструации.

Как сдавать мочу

Предварительно следует тщательно промыть половые органы. Кроме того, женщинам при обильных выделениях рекомендуется вставлять во влагалище тампон: это поможет избежать искажения результатов. Емкость для сбора биологической жидкости должна быть чистой. Рекомендуется приобрести специальные стерильные пластиковые контейнеры в аптеке.

Трогать емкость руками изнутри не следует (так можно занести в нее бактерии, из-за которых результаты исследования будут искажены), после сбора мочи сразу закрыть крышкой.

Рекомендуется начать испражняться в унитаз, после чего подставить контейнер, собрать требуемое количество жидкости. Завершать мочеиспускание следует тоже в унитаз. Моча должна быть доставлена в лабораторию не позже, чем через 2 часа после сбора; в противном случае могут начаться реакции, из-за которых исследование будет неточным.

Основные признаки туберкулеза у взрослых и детей

Палочка Кохи передается воздушно-капельным путем.

При попадании в организм она заражает все внутренние органы человека, но сначала воздействию подвергаются легкие и лимфатические узлы. Нередко инфицируется и кишечник.

Опасность болезни — это длительное не проявление симптомов. Микроорганизмы возбудителя могут находиться в гортани на протяжении года, и при этом не проявлять никаких признаков. Больше всего инфицированию подвержены дети, по этой причине в школах, в детских садах регулярно проводятся медосмотры и делаются реакции на манту.

Симптоматика заболевания у взрослых и детей схожа. Это повышение температуры тела в вечернее время.

Состояние больного постепенно ухудшается, пропадает аппетит, уменьшается резко масса тела. Кожа приобретает бледноватый оттенок, постоянное ощущение слабости, снижение работоспособности, горло может болеть. Сердечный ритм повышается, происходит обильное потоотделение. Такие симптомы характерны и для пневмонии.

Туберкулез - симптомы, признаки и лечение. Первые признаки туберкулезаТуберкулез – симптомы, признаки и лечение. Первые признаки туберкулеза

Важно, что у взрослых пациентов признаки не так сильно выражены, как у малышей. В большинстве случаев их можно спутать с другими болезнями.

Основные симптомы туберкулезной инфекции:

  • кашель любой формы, может быть с мокротой или без, сухой;
  • отдышка — работа легочной системы нарушена, и туберкулезник постоянно ощущает нехватку кислорода;
  • увеличение лимфатических узлов;
  • хриплость — во время обследования, при прослушивании легких, врач слышит хрипы. Дыхательная система полностью меняется;
  • активное уменьшение массы тела — при необъяснимых причинах больной за короткий промежуток времени теряет в весе около 10 кг;
  • температура — на первых этапах развития заболевания данный симптом может отсутствовать, или повышаться только в вечернее время до 37 градусов. На последней стадии, температура поднимается до 40С.

Ссылка на основную публикацию
Похожие публикации
Общество с ограниченной ответственностью
«Клиника высокотехнологичной медицины»
Адрес: 140009, РФ, Московская область, город Люберцы, улица Митрофанова, дом 11А
Тел. 8(495)565-48-08; 8(495)558-54-29;
ИНН 5027250575 КПП 502701001 ОГРН 1175027007033